单细胞测序中影响建库浓度低的原因有哪些？

影响基因文库构建的因素有哪些？

• 建库：把基因组序列随机片段化成小片段，再构建成与测序平台匹配的长度和结构的过程。 如果文库上机测序的浓度很低，样本在FlowCell 上扩增所形成的DNA样本簇就会很少，测序数据量也会随之减少，从而导致测序实验失败。
• 因素包括：实验前准备、基因组DNA片段化、末端修复、加A、接头连接、磁珠纯化、PCR扩增。 -- 磁珠准备：磁珠提前置于室温30分钟平衡，以保持磁珠活力。同时使用前需充分混匀； -- 末端试剂&加A接头：末端修复试剂加入准确，否则易导致DNA的粘性末端变为平末端的修复程度差；加A与接头T互补配对，增加接头连接效率。 -- 磁珠纯化：优先吸附大片段。先大片段再小片段；酒精现用现配（不可使用常温储存的酒精）； -- PCR扩增：避免试剂多加或者漏加，操作不当会导致建库失败；