NK+HEK293细胞双杀！AD600150玩转Trim28-Eomes互作实验

1. 本文章主要研究方向

‌研究方向‌：本文主要研究了热休克蛋白gp96（也被称为Hsp90B1或Grp94）在调节自然杀伤（NK）细胞发育、成熟和功能中的作用，特别是通过稳定转录因子Eomesodermin（Eomes）来影响NK细胞的抗肿瘤免疫。

‌原文期刊及DOI‌：本文发表在《Nature Communications》上，DOI为10.1038/s41467-024-45426-5。

2. 期刊影响因子

Nature Communications 影响因子：16.6

3. ZETA life转染试剂（AD600150）在实验中的应用

转染试剂型号：Advanced DNA RNA Transfection Reagent（货号：AD600150）

转染细胞及基因：

• 原代小鼠NK细胞：转染Eomes过表达质粒（用于验证Eomes对DX5表达的挽救效应）。

• HEK293细胞：

  ◦ 转染Flag-gp96和His-Eomes（验证gp96对Eomes稳定性的调控）。

  ◦ 转染HA-Trim28和Myc-Eomes（研究Trim28介导的Eomes泛素化降解）。

  ◦ 转染siRNA靶向Trim28（验证Trim28对Eomes蛋白水平的调控）。

4. 转染实验数据及贡献分析

实验数据定位

1. 原代NK细胞转染Eomes（Fig.5E）：

◦ 实验内容：通过转染Eomes过表达质粒，恢复gp96缺陷型NK细胞中DX5的表达。

  ◦ 结果：DX5+ NK细胞比例显著回升（p=0.0117），证明Eomes是gp96调控NK成熟的关键下游因子。

2. HEK293细胞转染gp96与Eomes（Fig.6G）：

◦ 实验内容：过表达gp96增强Eomes的蛋白稳定性。

  ◦ 结果：CHX处理后，gp96组Eomes半衰期延长（p<0.05），证实gp96抑制Eomes降解。

3. HEK293细胞转染Trim28与Eomes（Fig.7C,7E）：

◦ 实验内容：Trim28过表达导致Eomes蛋白减少及Lys63泛素化增强。 ◦ 结果：Trim28组Eomes降解加速（p<0.01），泛素化水平升高（p<0.001）。

5.转染试剂的核心贡献

• 高效递送能力：成功转染难转染的原代NK细胞（转染效率>60%），为功能挽救实验提供技术保障。

• 多场景适用性：支持HEK293细胞中外源基因（gp96、Trim28、Eomes）的共转染及siRNA沉默实验，确保机制研究的完整性。