Brefeldin A 别名：BFA; Cyanein; Decumbin; 布雷非德菌素A（AbMole）

Brefeldin A（布雷菲德菌素A）是一种源自真菌的大环内酯类抗生素，也是细胞生物学研究中一个非常重要的工具分子。它因其能独特地干扰细胞内部蛋白质运输而备受关注。

化学性质

• 化学名称： (1R,6S,11aS,13S,14aR)-1,13-dihydroxy-6-methyl-1H,4H,6H,7H,8H,9H,11aH,12H,13H,14H,14aH-cyclopenta[f]oxacyclotridecan-4-one
• 别名： BFA; Cyanein; Decumbin; 布雷非德菌素A；蛋白转运抑制剂
• CAS号： 20350-15-6
• 分子式： C₁₆H₂₄O₄
• 分子量： 280.36 g/mol
• 外观： 白色至类白色的结晶性粉末
• 纯度：99%
• 厂商：AbMole
• 熔点： 约 201-205°C
• 溶解性： 在水溶液中溶解度很低。易溶于DMSO（可达100 mg/mL）、乙醇和甲醇。
• 稳定性与保存： 固体粉末应在-20°C、避光、干燥条件下保存。配制的溶液（例如用DMSO配制10 mg/mL的储存液）也建议在-20°C避光保存，并避免反复冻融。

作用原理与机制

Brefeldin A 最主要的作用是可逆地抑制蛋白质从内质网向高尔基体的转运。

在正常情况下，细胞分泌的蛋白质和膜蛋白在内质网合成后，会被运输囊泡包裹，运往高尔基体进行进一步的加工和分选。BFA 通过抑制一类鸟苷酸交换因子 的活性来干扰这个过程。这些交换因子负责激活小G蛋白ADP核糖基化因子。当Arf1不能被激活时，负责包裹运输囊泡的“外壳蛋白”就无法被招募到高尔基体膜上，导致运输囊泡无法形成。

因此，在BFA的作用下，蛋白质的顺向运输被阻断，内质网中会聚集大量无法运出的蛋白质。同时，高尔基体本身的结构也会被破坏，并逐渐被内质网“吞噬”、融合，导致这两个细胞器在形态上难以区分。

这种对细胞内部结构的巨大扰动，会引发强烈的内质网应激。持续的内质网应激会激活未折叠蛋白反应，如果应激无法缓解，细胞最终会走向凋亡。此外，BFA也被发现能够抑制自噬和线粒体自噬。

实验应用

研究蛋白质分泌与细胞器功能： 这是BFA最经典的应用。科学家利用它来中断分泌途径，从而研究特定蛋白质（如细胞因子、抗体、激素）的分泌过程、膜蛋白的转运以及高尔基体和内质网的功能。

增强细胞内抗原的免疫检测： 在流式细胞术或免疫荧光实验中，BFA常被用来抑制细胞因子的分泌，使其在细胞内累积，从而更容易被抗体检测到，大大提高了检测的灵敏度。

癌症研究： BFA能够诱导多种肿瘤细胞发生凋亡，因此被广泛用于研究其抗癌活性和机制。研究表明，BFA可以通过内质网应激通路，与化疗药物（如顺铂）产生协同作用，更有效地抑制癌细胞增殖。

研究生殖生物学与毒性： 近期研究利用BFA探究其对卵母细胞成熟和卵巢功能的影响，揭示了其潜在的生殖毒性，为研究卵巢衰老提供了新的视角。

病毒学与CRISPR研究： BFA被报道具有抗病毒活性（如抑制HSV-1病毒），并且可以作为CRISPR/Cas9基因编辑技术的激动剂，提高编辑效率。

实验注意事项

使用浓度： BFA的常用工作浓度范围通常在1 μM 到 50 μM 之间（约合0.28 μg/mL 到 14 μg/mL）。具体浓度需根据实验目的和细胞类型参考相关文献或进行优化。例如，抑制蛋白质转运可能仅需较低浓度（~100 ng/mL），而诱导凋亡则需要较高浓度（~10 μg/mL）并延长处理时间。

溶剂对照： 由于BFA常用DMSO溶解，实验中必须设置含有相同终浓度DMSO的溶剂对照组，以排除DMSO本身对细胞的影响。

毒性警示： BFA对细胞有显著毒性，特别是在较高浓度和较长处理时间下。同时，它已被证实对雌性小鼠的生殖系统有毒性作用。严禁用于人体。