WB实验三|如何转膜与快速转膜仪介绍

上期我们讲解了WB实验中的电泳步骤和电泳仪，这回我们将主要介绍WB实验如何转膜以及快速转膜仪。

转膜的详情介绍

1.转印膜的选择：

膜的选择也是Western Blot实验中一个重要的环节，需要根据被转移蛋白的特性及蛋白分子量大小等条件去选择合适材质和孔径的膜。Western Blot实验中最常用的转印膜有两种：PVDF膜和NC膜。

2.膜的孔径选择：

选到合适材质的膜之后，还需要根据需检测蛋白的大小，选择合适的膜孔径。Western Blot转印膜通常有两种孔径大小：0.2μm（BS-PVDF-22-S）和0.45μm（BS-PVDF-45-S）。0.2μm ：特别适合小于20kD的蛋白；推荐用于低丰度蛋白检测。0.45μm：更加常用，适合大于20kD的蛋白；比表面积较小，背景较低。

3.转膜

定义：是将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体上的过程。

转膜方式主要有两种：湿转和半干转。两者原理相同，只是用于固定胶/膜叠层及施加电场的仪器有不同。在Western Blot实验中，常用的是湿转。湿转是转膜最完全且应用最广泛的方法，但是所需时间较长。

以湿式转印系统为例：

4.转膜时间参考下表：

5.转膜效率的判断：

膜上蛋白Marker转移情况；

转膜结束后可用丽春红染膜进行可逆转色判断转移效果；

考马斯亮蓝进行染胶，反向判定胶上残留蛋白；

蛋白Marker

丽春红染膜

考马斯亮蓝染胶

    快速转膜仪是一款快捷高效的WB转膜设备，快速转膜仪基于创新型的转膜方式，结合了湿转与半干转的优点，兼具湿转的稳定和半干转的效率，从物力原理上解决湿转电流侧漏，半干转缓冲液量少、缓冲液离子浓度持续降低、缓冲能力衰减过快的问题，能维持转膜恒压的同时恒流，因此兼顾转膜速率的同时确保转膜最大的转膜效率。

快速转膜仪的优势

快速高效：传统的WB转膜设备通常需要数小时才能完成转膜过程，而快速转膜仪能在短时间内完成转膜，大大缩短了实验时间。

均匀一致：快速转膜仪采用均匀的电场分布和温和的转膜条件，确保蛋白质能够均匀地转移到膜上，提高转膜效率和准确性。

可调节参数：科研人员可以根据需求调整电场强度、转膜时间和温度，以达到最佳的转膜效果。

多样性适用性：快速转膜仪适用于各种尺寸和类型的凝胶和膜，可以满足不同实验需求。

WB实验转膜和快速转膜仪就讲解到这里了，敬请期待下一期。