AAT Bioquest:低丰度靶标染色神器----TSA和PSA

今天，给大家介绍一种用于细胞和组织中低丰度靶标的高分辨率成像技术。TSA/PSA是一种成熟的细胞信号放大技术，当TSA/PSA与我们光稳定性、水溶性的iFluor染料结合后，产生的荧光信号具有比传统组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光方法产生的信号更高的灵敏度。PSA是美国AAT Bioquest自主研发的与TSA功能类似的信号放大方法，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。

TSA/PSA原理

酪胺信号放大（TSA）是一种基于辣根过氧化酶（HRP）的催化活性对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。原理为酪胺Tyramide的过氧化物酶反应（已标记荧光的酪胺在HRP催化H₂O₂下形成共价键结合位点）产生的大量酶促产物与目标蛋白的酪氨酸残基共价结合，从而使目标蛋白标记上特异的荧光或生物素。

图1.TSA/PSA原理及工作流程图。对比传统ICC和IHC方法的工作流程，TSA/PSA试剂可以通过较简单的步骤实现对所需目标的灵敏检测。

TSA/PSA特点

TSA特点

1.适用广，多色标记

2.多重标记可避免抗体种属交叉问题

3.染色特异性好，信号强度高，适合低丰度靶标

4.石蜡切片样本荧光染色背景干净

PSA特点

1.检测灵敏度提高了100多倍，比标准IHC，ICC，IF方法高出100倍

2.改进的荧光信号比酪胺（TSA）试剂高10至50倍

3.PSA 自由基的更高反应性允许在HRP-靶相互作用位点更快速，有效和更稳定记Styramide缀合物。

4.在不降低灵敏度的情况下，PSA可以使用更少的抗体/探针

TSA/PSA部分实验结果展示

图2.分别用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蜡包埋人肺腺癌阳性组织的染色结果图。人肺腺癌阳性组织切片用兔抗EpCam抗体染色，接着用polyHRP标记的山羊抗兔IgG二抗孵育，再使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分别染色。图像显示iFluor 488 PSA与Alexa Fluor 488 TSA相比提高了荧光IHC的灵敏度。

图3.分别用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蜡包埋人肺腺癌阳性组织的染色结果图。人肺腺癌阳性组织切片用兔抗EpCam抗体染色，再用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗孵育。显影：iFluor 488 酪胺（左）；Alexa Fluor 488 酪胺（右）。核染色：DAPI

图4.Styramide 超级信号放大试剂盒的信号强度对比。 （A）将HeLa细胞固定，透化并用各种浓度的兔抗微管蛋白一抗标记，建议的稀释浓度为：1：500。 将细胞直接与AlexaFluor488缀合的山羊抗兔IgG二抗染色，后分别与HRP标记的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide（#45205）染色。 使用FITC滤光片组拍摄荧光图像，并以相同的曝光时间进行分析。 （B）测量相对荧光信号强度，并比较不同检测方法之间的强度。