默克生命科学 | 蛋白质免疫印迹检测工作流程

01 蛋白提取

当使用细胞或组织进行检测时，必须在分析前将样品破碎以分离出蛋白。裂解和提取缓冲液使用去污剂来破坏细胞壁和细胞膜并释放蛋白质。应根据样品类型和目标蛋白的亚细胞定位来选择理想的缓冲液。实验流程详情可以去默克的官网搜索查看www.sigmaaldrich.cn。

02 凝胶电泳

蛋白凝胶电泳用于在印迹前对蛋白进行分离和区分。制备的蛋白混合物在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，从而通过分子量和电荷对蛋白进行区分。

03 转印到膜

通过电泳在凝胶上分离的蛋白质被转印到PVDF或硝酸纤维素膜上进行固定。转印过程利用电流将蛋白质从凝胶转移到膜上（电印迹）。

04 检测方法

通过将一抗与偶联了HRP或AP的二抗联合使用并采用适当的化学发光或比色底物，或使用荧光标记的一抗或二抗，对目标蛋白进行检测。