优化基因疗法上游生产工作流程,最大限度提高病毒载体滴度,为成功生产奠定基础。然而,由于没有经过验证的流程模板,工艺开发团队必须对病毒载体生产的各个方面进行评估,包括:
原料和起始材料
细胞培养基
细胞和病毒生长、澄清过滤和核酸消化的条件
为了最大限度减少这些工艺投入的变数和风险,基因疗法生产商可以与经验丰富的、在 病毒载体生产 以及相关产品和服务的各个方面都有专长的技术伙伴进行合作。想了解生物技术研究、开发和生产内容可以去默克www.sigmaaldrich.cn查看
解冻并扩增细胞和种子
将来自工作细胞库或主细胞库的冷冻细胞解冻并扩增,以增加其数量,为后续处理步骤做准备。
培养基和接种物制备
利用适合细胞生长和病毒生产的营养物质、补充剂和 pH 环境对细胞培养基进行优化。
细胞生长和病毒生产
细胞在生物反应器或其他特定条件下的受控环境中生长,以最大限度地提高病毒产量。
细胞裂解
在 AAV 生产过程中,通过化学或机械方法裂解宿主细胞,使病毒释放到培养基中。
DNA 消化
使用核酸酶消化不需要的全细胞和质粒 DNA。
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