基于CRISPRCas9技术开发的用于肿瘤突变负荷(TMB)测量的新型FFPE原创

TMB及肿瘤突变复合tomitational burden是基因组编码区域中非同一体细胞突变的总数。理论上，TMB水平可以反映肿瘤新抗原产生的概率，从而反映免疫识别和杀伤肿瘤细胞的可能性。TMB被认为是一个重要的肿瘤生物标志物，可以预测免疫检查点抑制剂治疗的效果。通常使用全外显子测序VS和全基因组重测序分析来检测。由于不同检测方法和实验室之间存在差异，TMB测量结果差异显著。为提高准确性、可靠性和可比性，急需合格的参考材料来协调测量。为解决这些问题，研究组使用cri SPR ks9技术在人类细胞系中，比如MSSHR和po基因突变，构建高突变负荷的细胞系，并与原始型细胞按精确的比例混合制成福尔马林固定石蜡胞埋非样本，该样本细胞量大、重复性高，并提供匹配的原始。

形细胞作为遗传背景，研究组通过全外显子测序VS验证了细胞系和非样本的突变谱和TMB水平，发现突变细胞系的TMB水平显著高于原始型细胞，非样本的TMB水平范围为2.0~106.1米at MB覆盖了临床相关范围，且与临床样本的测序数据质量和突变模式相似，具有良好的可比性。非新型参考物具有可持续性、均一性和灵活性，可用于TMB检测的验证和质量控具，为TMB检测提供了可靠的标准化工具。为了得到这些结果，研究组在全外显子测序中使用CTN进行alignment sorting比对排序，Local realignment局部重新比对dulicate removal重复序列去除base quality score re colllibration、碱基质量分数重校准c TN ten CC流程可以分析肿瘤变异，与b one目T2金标准流程的分析结果一致性高达9%。

59.5以上，同时整体提速5~10倍，能更快的向研究人员提供肿瘤样本检测结果，加速推进研究进程。