**摘要：** PEI转染中看到团块、细小颗粒或絮状物时，需要先判断它们来自细胞自身、DNA-PEI复合物聚集，还是细胞状态下降后的残留物。本文围绕出现时间、镜下形态和制备过程，整理悬浮细胞结团、复合物稳定性、抗结团剂兼容性及试剂配制的排查思路，帮助将观察现象与需要检查的环节对应起来。

**关键词：PEI转染细胞结团、悬浮细胞转染、DNA-PEI复合物聚集、转染絮状物、细胞碎片增多、PEI稀释液、抗结团剂与转染、PEI母液配制**

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## 一、看到团块时，先确认里面是什么

PEI转染后出现团块，并不一定意味着细胞已经死亡。部分团块由形态较完整的细胞组成，部分则以颗粒或折光物质为主，也可能同时包含细胞与聚集物。判断方向之前，应把镜下形态与出现时间放在一起看。

如果转染前已经存在细胞团块，应优先检查细胞本身的培养状态；如果DNA与PEI混合后、尚未加入细胞时就出现浑浊或絮状物，则更需要核查试剂和复合物制备。若先出现细胞皱缩、脱落或活率下降，随后碎片增多，检查重点应回到前面的细胞状态变化。

| 观察线索 | 提示的排查方向 | 需要进一步核查的内容 |
| :---: | :---: | :---: |
| 团块内可见形态较完整的细胞 | 细胞自身结团，或细胞与复合物共同形成团块 | 转染前是否已有结团、细胞状态与培养条件 |
| 混合液加入细胞前已出现颗粒或絮状物 | 试剂配制或复合物制备环节 | 母液状态、稀释液与制备过程 |
| 加入复合物后先出现絮状物，再出现细胞结团 | 复合物聚集可能参与其中 | 聚集物出现的时间及其与细胞的关系 |
| 细胞状态下降之后碎片明显增多 | 细胞损伤后的残留物可能增加 | 活率变化、复合物用量与前期培养条件 |

**表1：细胞团块、复合物聚集物与碎片的初步观察线索。镜下形态用于提出排查方向，不能单独确认物质组成。**

## 二、细胞结团的三个方向：复合物、相互作用与细胞本身

### 1. 复合物聚集：从加入细胞之前开始检查

DNA与PEI形成的复合物，其状态受制备环境影响。异常颗粒或絮状物如果在加入细胞前已经出现，就不能全部解释为细胞裂解后的碎片。此时应回查PEI母液、DNA溶液、稀释液以及复合物制备过程，确认异常最早出现在哪一步。

复合物的稳定性与稀释环境有关。针对PBS与氯化钠溶液的比较，相关研究曾在特定PEI/DNA体系中观察到PBS环境下复合物粒径增加，而相应NaCl条件未出现相同程度的失稳[1]。这一结果提示应关注稀释液组成，但不能扩展成“PBS必然导致聚集”或“氯化钠溶液始终稳定”。

实际排查时，应核对所用PEI产品及实验体系适用的稀释液，并保持制备过程一致。现配现用也应遵循相应的复合物形成流程，不能据此认定刚混合就一定可以加入细胞，或仅更换稀释液就一定能够解决结团。

### 2. 复合物与细胞的相互作用：保留可能性，不凭外观下结论

表面带正电的复合物可能与细胞表面发生相互作用，参与细胞间的桥连与靠拢，是悬浮体系中可以关注的排查方向。

这属于可能的解释方向。如果团块是在加入复合物后出现，仍需要结合复合物是否已经聚集、转染前细胞是否结团等信息判断，不能仅凭时间相近就确认桥连机制。排查重点是先建立现象与条件的对应关系。

### 3. 细胞自身的生长性结团：先检查转染前状态

部分细胞系在悬浮培养中本身就容易结团。如果转染前已经存在明显团块，应先处理基础培养状态，而不是将全部原因归给转染复合物。

较均一的细胞分散状态有助于复合物与细胞接触。细胞结团后，接触情况可能不均一，转染表现也可能受到影响；如果同时伴随细胞状态恶化，释放的细胞内容物还可能使团块更复杂。因此，结团观察应与细胞活率、生长状态和培养记录一起解读。

## 三、悬浮细胞结团，可以直接加入抗结团剂吗？

抗结团剂与转染过程之间存在兼容性问题。部分产品能够减少悬浮培养中的细胞聚集，但也可能干扰阳离子转染体系。已有抗结团剂的官方说明明确指出，其会干扰PEI等瞬时转染试剂，需按该产品说明安排使用阶段[2]。

因此，看到结团时不宜直接把“加入抗结团剂”作为通用处理。应先确认当前体系是否已经含有这类添加剂，再核查所用产品对转染前去除、转染期间使用或转染后恢复使用的要求。

不同产品与细胞体系的安排不能互相替代。是否需要提前去除、何时恢复使用，以及相应的处理条件，都应核对具体说明。核心检查项是**抗结团剂是否与当前PEI转染流程相容**。

## 四、培养液中碎片增多，区分细胞残留物与试剂颗粒

### 1. 细胞状态下降后的残留物

细胞裂解后的残留物以及释放的核酸，可能伴随黏丝状物质或边缘不规则的团块。这类现象若出现在细胞状态下降之后，应优先回查之前的活率变化、复合物用量及培养条件。

此时，单纯减少可见碎片并不能说明起始问题已经解决。更需要确认细胞状态是否恢复，以及相同培养条件下是否仍持续出现新的碎片。

### 2. 未完全溶解或析出的PEI及相关聚集物

另一类需要排查的是试剂或复合物相关颗粒。未完全溶解、析出的PEI或聚集复合物，可能表现为细小颗粒、折光物或絮状物，也可能早于细胞状态变化出现。

如果在母液、稀释液或复合物混合液中已经能够观察到异常，应回到相应的配制与保存环节核查。使用PEI 25K、PEI MAX等不同材料时，应分别核对对应说明，不能仅因为都属于PEI，就沿用同一套溶解或保存条件。

换液后颗粒是否减少，可以作为记录的一部分，但不能单独证明其来源。细胞残留物与其他悬浮颗粒都可能随培养液更换而减少，判断仍需结合出现时间和制备过程。

## 五、把排查过程整理成可以复查的记录

针对结团与絮状物，记录不应只有“有”或“没有”，还应包括何时出现、在哪个样品中出现，以及是否伴随细胞状态变化。将转染前细胞、复合物混合液和转染后培养物的观察对应起来，更容易定位需要检查的环节。

| 记录环节 | 重点记录内容 | 用于回答的问题 |
| :---: | :---: | :---: |
| 转染前细胞 | 生长状态、活率、密度、是否已有结团 | 异常是否先于转染存在 |
| 试剂与复合物制备 | PEI类型、母液状态、稀释液、DNA和PEI用量、制备与使用时间 | 颗粒是否来自制备过程 |
| 加入复合物后 | 团块或絮状物首次出现时间、镜下形态、活率变化 | 聚集与细胞状态变化的先后关系 |
| 条件调整后 | 实际调整内容、细胞活率与转染表现 | 调整是否同时改善培养状态和转染结果 |

**表2：PEI转染结团与颗粒问题的记录要点。比例记录应同时注明DNA与PEI的先后顺序及其定义。**

需要进一步比较用量时，先固定细胞密度，在小范围内摸索DNA用量和PEI与DNA比例，并同时观察活率与转染效果。如果两项指标只是一升一降，应回到细胞状态、复合物制备和培养条件进行整体检查。

![PEI转染的小范围优化、基础条件稳定与系统排查流程](https://developer.qcloudimg.com/http-save/yehe-12003223/20bceb2abc17e3e7617a1c66103a0e63.jpg)

**图1：PEI转染优化流程。将用量比较与基础培养、复合物制备检查结合起来，避免围绕单一参数反复调整。**

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## 常见问题（FAQ）

### 1. 转染前已经结团，还需要先调整PEI比例吗？

应先检查细胞的基础培养状态。转染前已经存在的结团，不能归因于尚未加入的复合物；基础状态不一致也会影响后续比例比较。

### 2. 培养液里有絮状物，是否说明细胞已经死亡？

不能仅凭絮状物判断。它可能与细胞残留物有关，也可能来自试剂或复合物聚集，需要结合出现时间、细胞活率及制备过程区分。

### 3. 把PBS改成氯化钠溶液，就能避免复合物聚集吗？

不能作这样的保证。稀释液选择需要与PEI类型和具体制备条件匹配，特定研究中的稳定性比较不能直接变成所有体系的通用结论。

### 4. 抗结团剂减少了团块，就一定有利于转染吗？

不一定。部分抗结团剂可能干扰PEI转染，需要核查兼容性，并同时观察转染结果，不能只依据团块减少作判断。

## 参考资料

[1] Key Molecular Parameters of PEI for Efficient DNA Delivery Into HEK293T Cells. 2026. DOI: 10.1002/macp.70343.

[2] Thermo Fisher Scientific. Anti-Clumping Agent. Publication Number MAN0009950, Rev. 1.00.

## 关于技术来源

> 本文依据PEI转染技术资料、相关研究及试剂官方说明。内容侧重现象区分与实验排查，不同PEI材料、细胞系和培养方式应分别核对适用条件。

摘要： PEI转染中看到团块、细小颗粒或絮状物时，需要先判断它们来自细胞自身、DNA-PEI复合物聚集，还是细胞状态下降后的残留物。本文围绕出现时间、镜下形态和制备过程，整理悬浮细胞结团、复合物稳定性、抗结团剂兼容性及试剂配制的排查思路，帮助将观察现象与需要检查的环节对应起来。

PEI转染后细胞结团、絮状物增多？悬浮培养与复合物制备排查

PEI转染中看到团块、细小颗粒或絮状物时，需要先判断它们来自细胞自身、DNA-PEI复合物聚集，还是细胞状态下降后的残留物。本文围绕出现时间、镜下形态和制备过程，整理悬浮细胞结团、复合物稳定性、抗结团剂兼容性及试剂配制的排查思路，帮助将观察现象与需要检查的环节对应起来。

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PEI转染中出现团块、颗粒或絮状物时，需从出现时间、镜下形态和制备过程三方面排查。区分细胞自身结团、DNA-PEI复合物聚集与细胞碎片残留，关注稀释液选择、抗结团剂兼容性及PEI母液配制，结合细胞活率变化定位异常环节，建立完整的观察记录以提升转染稳定性。

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